Screening and partial purification of amylase from Aspergillus Niger isolated from deteriorated tomato (Lycopersicon Esculentum mill.) fruits

Abstract

Amylases (EC 3.2.1.1) are cellwall degrading enzymes associated with the pathogenicity of microorganisms in the spoilage of tomato fruits. The use of amylase in many industries has made it very important to optimize production process to achieve maximum yields. Screening and partial purification of Amylase from Aspergillus niger isolated from tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) fruits was studied. Amylase producing fungi were isolated from fresh tomatoes kept at ambient temperature (28±1˚C). Isolates were characterized on the basis of their morphological and cultural techniques. Partial purification of amylase was carried out by ammonium sulphate precipitation. The enzyme activity was determined and optimum conditions were obtained. The molecular weights of the crude and partially purified Amylase were determined by SDS PAGE method. A total of five isolates were obtained using basic screening technique for amylase activity, one of the isolates (Isolate code F2) exhibited maximum amylase activity. The fungi isolate code F2 was identified as Aspergillus niger. Optimum conditions for Amylase AMY F2 were ascertained at pH 6.0; temperature 30°C; substrate concentration of 0.3mg/ml, and time of heating of less than 10min. The molecular weights  f the crude and partially purified Amylase AMY F2 were found to be 55kDa and 35kDa respectively by SDS PAGE method. Microorganisms had been an encouraging means of economical production of enzymes in large scale for the food and drug industry. 

Keywords: Amylase, Partial Purification, Enzyme, Tomato Fruits

Rendement et purification partielle de l'amylase de Aspergillus Niger isolé à partir de tomate déterioré (Lycopersicon Esculentum mill.) fruits

Les amylases (EC 3.2.1.1) sont des enzymes dégradant les parois cellulaires associées à la pathogénicité des microorganismes dans la détérioration des fruits à la tomate. L'utilisation de l'amylase dans de nombreuses industries a rendu très important d'optimiser le processus de production pour obtenir des rendements maximaux. Le dépistage et la purification partielle de l'amylase d'Aspergillus niger isolés à partir des fruits à la tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) Ont été étudiés. Les champignons producteurs d'amylase ont été isolés à partir de tomates fraîches conservées à température ambiante (28 ± 1 ° C). Les isolats ont été caractérisés en fonction de leurs techniques morphologiques et culturelles. La purification partielle de l'amylase a été réalisée par précipitation au sulfate d'ammonium. L'activité enzymatique a été déterminée et des conditions optimales ont été obtenues. Les poids moléculaires de l'Amylase brut et partiellement purifiée ont été déterminés par un procédé SDS PAGE. Au total, cinq isolats ont été obtenus en utilisant une technique de dépistage basique pour l'activité amylase, l'un des isolats (code isolé F2) présentait une activité amylase maximale. Le code isolant F2 des Fusions a été identifié comme Aspergillus niger. Les conditions optimales pour Amylase AMY F2 ont été déterminées à pH 6,0; température 30 ° C; concentration de substrat de 0,3 mg / ml et temps de chauffage de moins de 10 min. On a trouvé que les poids moléculaires de l'amylase brute et partiellement purifiée étaient respectivement de 55 kDa et 35 kDa par le procédé SDS PAGE. Les microorganismes ont été un moyen encourageant de production économique d'enzymes à grande échelle pour l'industrie alimentaire et pharmaceutique.

Mots-clés: Amylase, Purification partielle, Enzyme, Fruits tomates