Profilage phytochimique par chromatographie sur couche mince haute performance d’extraits de flavonoïdes totaux du Drepanoalpha® et évaluation de leur activité anti-drépanocytaire in vitro

Abstract

Contexte et objectif. Le défi le plus important dans la drépanocytose consiste à améliorer l’état de santé des patients dans les pays en développement. L'une des meilleures solutions est donc le développement de la phytomédecine basée sur la connaissance de la pharmacopée traditionnelle. L’objectif de la présente étude était d’évaluer les activités anti-drépanocytaires des flavonoïdes totaux extraits du phytomédicament Drépanoalpha® d’une part et déterminer leur profilage chimique par chromatographie sur couche mince haute performance d’autre part. Méthodes. Les flavonoïdes totaux ont été obtenus par fractionnement de l’extrait méthanolique par chromatographie flash (PURIFLASH COLUMN 30 SILICA HP - 12,0 g) et purifies à l’aide d’une cartouche (Polymeric Reversed Phase) puis caractérisés et dosés par chromatographie sur couche mince haute performance (CCMHP). L’activité anti-drépanocytaire a été mise en évidence grâce aux tests d’Emmel, de polymérisation, de rapport Fe2+/Fe3+, d’hémolyse et de la fragilité osmotique membranaire. Résultats. La poudre du Drépanoalpha® contenait une quantité de flavonoïdes totaux de 8,14 mg équivalent de quercétine/g d'extrait. Les flavonoïdes totaux extraits du Drépanoalpha® possèdent une activité antifalcémiante (avec le taux maximal de normalisation d’environ 90 % et une concentration minimale de normalisations de 11,4 μg/mL), un taux d’augmentation du rapport Fe2+/Fe3+ de 97,0 %, une activité anti-hémolytique avec une fragilité corpusculaire membranaire des érythrocytes (FCM) de 0,73 et un taux d’inhibition de la polymérisation de 77,5%. Conclusion. La pertinence des résultats de cette étude permet de confirmer les flavonoids comme phytomarqueur pour le contrôle de qualité et de standardisation de cet alicament.

English Title: In vitro evaluation of anti-sickling activity of crude flavonoid extracted from Drepanoalpha® and their phytochemical profiling by high performance thin layer chromatography

Abstract

Context and objective. The most important challenge in Sickle cell disease is to improve the health status of patients in developing countries. One of the best solutions is the development of phytomedicine based on the knowledge of the traditional pharmacopoeia. This study aimed to evaluate the anti-sickling activities of crude flavonoids extracted from the phytomedicine Drépanoalpha® on the one hand and to determine their chemical profiling by high performance thin layer chromatography on the other hand. Methods. Crude flavonoids were obtained by fractionation of the methanolic extract by flash chromatography (PURIFLASH COLUMN 30 SILICA HP - 12.0 g) and purified using a cartridge (Polymeric Reversed Phase) then characterized and assayed by high performance thin layer chromatography (HPTLC). The anti-sickling activity was carried out using Emmel, polymerization, Fe2+/Fe3+ ratio, hemolysis and membrane osmotic fragility tests. Results. Drepanoalpha® powder contained an amount of total flavonoids of 8.14 mg quercetin eq/g extract. The total flavonoids extracted from Drépanoalpha® have an antisickling activity (with a maximum reversibility rate of about 90% and a minimum reversibility concentration of 11.4 μg/mL), an increase rate of the Fe2+/Fe3+ ratio of 97.0%, an antihemolytic activity with a corpuscular membrane fragility of erythrocytes (FCM) of 0.73 and a polymerization inhibition rate of 77.5%. Conclusion. Findings from the present study confirm flavonoids as a phytomarker for the quality control and standardization of Drépanoalpha®.

Keywords: Drépanoalpha®, Sickle cell disease, Hemoglobin S, Polymerization, Methemoglobin, Flavonoids